【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
【包裝規(guī)格】
96人份/盒
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人血清和血漿中的丙型肝炎病毒游離核心抗原。
利用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理(ELISA)定性檢測(cè)人血清或血漿樣品中的丙型肝炎病毒游離核心抗原,做輔助檢測(cè)用。
丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是引起輸血后病毒性非甲非乙型肝炎的主要病原,主要通過(guò)輸血、靜脈吸毒傳播,也可通過(guò)密切接觸和母嬰傳播。目前全世界約有1.3至1.7億人為慢性丙肝病毒感染,每年有35萬(wàn)多人死于與丙型肝炎相關(guān)的肝臟疾病,據(jù)估計(jì),每年有三、四百萬(wàn)人感染丙肝病毒。
丙肝病毒感染有時(shí)會(huì)導(dǎo)致急性癥狀疾病。從嚴(yán)重程度看,感染丙肝病毒有可能只出現(xiàn)幾周輕微癥狀,也可能終身患有嚴(yán)重慢性肝病,并可能導(dǎo)致肝硬化和肝癌。最初被感染后,大約80%的人并不會(huì)出現(xiàn)任何癥狀。可能出現(xiàn)的急性癥狀包括發(fā)熱、全身乏力、食欲下降、惡心、嘔吐、腹痛、尿色深、大便顏色變淺、關(guān)節(jié)酸痛和黃疸(皮膚和眼白發(fā)黃)。慢性感染者出現(xiàn)癥狀,可能表明其患有晚期肝病。一般地,15~20%左右的HCV感染者為自限性感染,超過(guò)80~85%的感染者發(fā)展為慢性丙型肝炎,其中又有20%的可發(fā)展為肝纖維化,最終有4~5%的肝纖維化患者發(fā)生肝細(xì)胞性肝癌,危害十分嚴(yán)重。丙型肝炎是由丙肝病毒引起的肝病。
丙型肝炎核心抗原檢測(cè)是新近發(fā)展的一種HCV感染的檢測(cè)方法。由于感染HCV后,HCV核心抗原出現(xiàn)較早,且與血清中HCV RNA載量呈正相關(guān),并在HCV感染治愈或康復(fù)后消失,因此,可作為HCV感染的早期診斷、獻(xiàn)血員篩查、慢性HCV感染診斷、高危人群監(jiān)測(cè)、免疫功能障礙患者的HCV感染診斷、鑒別既往感染抑或現(xiàn)癥感染,并可用于抗病毒療效的預(yù)測(cè)和監(jiān)測(cè)。
【檢驗(yàn)原理】
本品由基因重組表達(dá)的丙型肝炎病毒核心區(qū)抗原(HCV-cAg)免疫小鼠制備的單克隆抗體包被微孔板和酶標(biāo)記抗HCV-cAg單克隆抗體及陽(yáng)性、陰性對(duì)照血清等組成,應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法原理(ELISA)檢測(cè)人血清或血漿樣品中丙型肝炎病毒游離核心抗原。
【主要組成成分】
(1) |
抗體包被板 |
96人份×1塊 |
(2) |
酶結(jié)合物 |
20mL×1瓶 |
(3) |
陽(yáng)性對(duì)照血清 |
0.5 mL×1瓶 |
(4) |
陰性對(duì)照血清 |
0.5 mL×1瓶 |
(5) |
洗滌液(使用時(shí)20倍稀釋) |
50mL×1瓶 |
(6) |
顯色劑 A |
6mL×2瓶 |
(7) |
顯色劑 B |
6mL×2瓶 |
(8) |
終止液 |
6mL×1瓶 |
(9) |
樣品稀釋液 |
10mL×1瓶 |
(10) |
不干膠片 |
3張 |
注意:不同批號(hào)的組分不得混用。
各組份主要組成:(1)抗體包被板:包被有針對(duì)核心抗原的單克隆抗體;(2)酶結(jié)合物:三羥甲基氨基甲烷緩沖液,山羊血清,牛血清白蛋白;(3)陽(yáng)性對(duì)照血清:加入丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)為陽(yáng)性人血清;(4)陰性對(duì)照血清:加入丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)為陰性的血清;(5) 洗滌液:NaCl,曲拉通 X-100;(6)顯色劑A:三水合乙酸鈉,過(guò)氧化尿素;(7)顯色劑B:檸檬酸,乙二胺四乙酸,四甲基聯(lián)苯胺;(8)終止液:硫酸;(9)樣品稀釋液: Tris 緩沖液,NaCl,酪蛋白鈉,牛血清白蛋白,吐溫-20,曲拉通X-100,山羊血清,硫柳汞。
其他所需物品和儀器
1、新鮮制備的蒸餾水或去離子水;
2、一次性手套;
3、精確的微量移液器和潔凈的吸頭;
4、干凈的吸水紙;
5、37℃恒溫箱或水浴箱;
6、計(jì)時(shí)器;
7、洗板機(jī)或洗瓶;
8、振蕩器;
9、酶標(biāo)儀。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
2~8℃避光保存,有效期12個(gè)月。
生產(chǎn)日期及有效期至見標(biāo)簽。
【適用儀器】
自動(dòng)酶標(biāo)測(cè)定儀,雙波長(zhǎng)時(shí)設(shè)置主波長(zhǎng)450nm,參考波長(zhǎng)630nm。單波長(zhǎng)時(shí)設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)為450nm,并需設(shè)置空白對(duì)照調(diào)零。
【樣本要求】
1、樣本可以使用血清或者血漿,檸檬酸鈉、肝素或EDTA等抗凝劑不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2、樣本無(wú)需特殊制備處理,采用正確醫(yī)用技術(shù)采集全血樣本,靜置半小時(shí)以上后,3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘以上,充分分離血清,使血清不含或極少含紅、白細(xì)胞,否則可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
3、不能使用加熱滅活處理后的樣本,脂血樣本應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)前采用超速離心法澄清樣本。
4、黃疸或嚴(yán)重污染的樣本將導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、樣本中含有疊氮鈉會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,不能用疊氮鈉做樣本防腐劑。
6、血清樣本在未充分凝集前離心將導(dǎo)致纖維蛋白的存在,為避免纖維蛋白對(duì)結(jié)果的影響,必須確保離心處理前樣本已經(jīng)充分凝集。對(duì)于正在接受抗凝劑治療的病人樣本,需要延長(zhǎng)凝集時(shí)間。
【檢驗(yàn)方法】
1、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
(1)從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在室溫下平衡30分鐘。
(2)洗滌液配制:試劑盒中的洗滌液為濃縮洗滌液,在合適的潔凈容器內(nèi)用新鮮制備的蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液稀釋20倍,混勻備用。
(濃縮洗滌液為高濃度磷酸鹽緩沖液,在溫度低時(shí),可能會(huì)有結(jié)晶析出;請(qǐng)?jiān)谑褂们按_保濃縮洗滌液無(wú)結(jié)晶析出,如發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶析出,請(qǐng)放置水浴鍋中加熱溶解,否則會(huì)影響洗滌效果。)
2、操作程序
1)每次實(shí)驗(yàn)需在包被板上設(shè)置一個(gè)空白孔,設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照各雙孔。
2)加陽(yáng)性對(duì)照血清:設(shè)兩孔為陽(yáng)性對(duì)照,每孔加入陽(yáng)性對(duì)照血清200μL。
3)加陰性對(duì)照血清:設(shè)兩孔為陰性對(duì)照,每孔加入陰性對(duì)照血清200μL。
4)加樣品稀釋液:每孔(不包括陰、陽(yáng)性對(duì)照孔)中加入100μL樣品稀釋液�?瞻卓准尤�200μL樣品稀釋液。
5)加樣:樣品孔每孔加入樣品(血清或血漿)100μL。
6)溫育:用不干膠片封板后置37℃±1℃溫浴振蕩60分鐘。
7)洗滌:小心揭掉封板膜,吸去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體,用洗滌液工作液注滿每孔,每孔應(yīng)加入不少于400μL的洗滌液工作液。靜置5~10秒,吸去孔內(nèi)洗滌液,如此重復(fù)5次。最后在干凈的吸水紙上拍干。
8)加酶結(jié)合物:每孔加200μL酶結(jié)合物。
9)溫育:用不干膠片封板后置37℃±1℃溫浴30分鐘。
10)洗滌:操作同7。
11)加顯色劑:每孔先加入100μL顯色劑A,再加入100μL顯色劑B,充分混勻,37℃±1℃溫浴避光顯色15分鐘。
12)終止反應(yīng):每孔加50μL終止液,充分混勻。
13) 結(jié)果測(cè)定:結(jié)果需在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。使用酶標(biāo)儀測(cè)量各孔吸光度值,可選擇單波長(zhǎng)450nm(需設(shè)空白孔調(diào)零),或選擇雙波長(zhǎng)主波長(zhǎng)450nm,參考波長(zhǎng)630nm,讀取各孔OD值。
【【陽(yáng)性判斷值】
臨界值(CUT OFF)確定:陰性對(duì)照平均值+0.06(陰性對(duì)照OD值≤0.06時(shí)按0.06計(jì)算)。
陽(yáng)性對(duì)照每孔OD值>0.8,陰性對(duì)照OD值每孔<0.1時(shí),測(cè)定結(jié)果有效。
結(jié)果判定:
(1)待測(cè)樣品OD值≥臨界值(CUT OFF)判定為HCV核心抗原陽(yáng)性;
(2)待測(cè)樣品OD值<臨界值(CUT OFF)判定為HCV核心抗原陰性。
對(duì)初檢陽(yáng)性的樣品,應(yīng)進(jìn)行雙孔復(fù)檢以確認(rèn)真實(shí)結(jié)果。
【【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1、血清樣本未完全凝集、血漿樣本包含纖維蛋白或樣本被嚴(yán)重污染都會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響。
2、實(shí)驗(yàn)中使用長(zhǎng)時(shí)間貯存或反復(fù)凍融的樣本會(huì)對(duì)本試劑的檢測(cè)靈敏度造成影響,建議使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、本試劑盒僅用于定性檢測(cè)人血清或血漿樣品中的HCV游離核心抗原。
2、由于ELISA反應(yīng)原理的限制,本試劑檢測(cè)結(jié)果陰性并不能完全排除HCV感染的可能,檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性必須結(jié)合確證試劑或其他指標(biāo)和臨床信息進(jìn)行分析。
【【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、用5份企業(yè)HCV核心抗原陽(yáng)性參考血清檢測(cè),結(jié)果不得出現(xiàn)假陰性;用4份國(guó)家HCV核心抗原陽(yáng)性參考血清檢測(cè),陽(yáng)性參考品符合率(+/+)應(yīng)≥3/4。
用10份企業(yè)或國(guó)家HCV核心抗原陰性參考血清檢測(cè),結(jié)果不得出現(xiàn)假陽(yáng)性。用4份企業(yè)最低檢出限參考品檢測(cè),S1、S2 和S3應(yīng)為陽(yáng)性;S4為陰性;用5份國(guó)家最低檢出限參考品檢測(cè),L1、L2 和L3應(yīng)為陽(yáng)性,L4﹑L5可陽(yáng)性或陰性。
用企業(yè)或國(guó)家精密性參考品重復(fù)10次檢測(cè),所有孔實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性,CV(%)≤15%(n=10)。
穩(wěn)定性試驗(yàn)各組分置37℃6天后,上述四項(xiàng)指標(biāo)均應(yīng)符合規(guī)定。
2、本試劑檢測(cè)丙型肝炎病毒核心抗原的靈敏度為1pg/mL。
3、交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)表明,HBV,HIV和HAV陽(yáng)性樣本不影響本試劑盒對(duì)HCV核心抗原的檢測(cè)。對(duì)25例RF高濃度陽(yáng)性樣本及23份ANA高濃度陽(yáng)性樣本分別采用本試劑進(jìn)行HCV核心抗原檢測(cè),兩類樣本假陽(yáng)性數(shù)均為1例,特異性分別為96.0%和95.7%。
4、臨床研究60份同源血(同一患者的血清和血漿)檢測(cè)結(jié)果完全一致。
【【注意事項(xiàng)】
1、從2~8℃條件下取出的樣本應(yīng)置于室溫平衡30分鐘再進(jìn)行檢測(cè)。
2、須確保加樣量的準(zhǔn)確,如果加樣不準(zhǔn)確,可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3、使用微量移液器手工加樣時(shí),每次應(yīng)該更換吸頭吸取樣本。
4、在操作過(guò)程中應(yīng)盡量避免微孔中產(chǎn)生氣泡。
5、濃縮洗滌液系高濃度磷酸鹽,可能會(huì)形成結(jié)晶,如未完全溶解,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,同時(shí)可能會(huì)堵住自動(dòng)加樣器或洗板機(jī)管道。若出現(xiàn)結(jié)晶,請(qǐng)放置37℃充分溶解,然后稀釋均勻使用。
6、封板膠紙不能重復(fù)使用。
7、用水浴鍋反應(yīng)時(shí),請(qǐng)將反應(yīng)板浸放于水中1/3,底部以網(wǎng)格支撐物支撐,水溫控制在37℃。
8、洗板:(1)以洗板機(jī)洗板時(shí),洗板機(jī)的加液量至關(guān)重要,即避免洗液過(guò)量溢出,又能充滿反應(yīng)微孔中,洗板次數(shù)不應(yīng)少于5次,并經(jīng)常注意檢查加液頭是否堵塞。
(2)手工洗板時(shí),請(qǐng)勿使用帶紙屑的吸水材料拍板,以防外源性過(guò)氧化物酶類似物或氧化還原物質(zhì)與顯色劑發(fā)生反應(yīng),影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(3)洗板時(shí)所用的吸水紙請(qǐng)勿反復(fù)使用。
(4)洗板機(jī)最好在每次使用前、后,用蒸餾水或去離子水沖洗干凈,以防止管路堵塞或腐蝕。
9、如果有任何試劑接觸皮膚和眼睛,必須用大量清水對(duì)該部位進(jìn)行擴(kuò)大清洗和消毒;終止液為硫酸,具有腐蝕性。
10、試劑盒內(nèi)有關(guān)組份及臨床樣本均應(yīng)視為有潛在傳染性,請(qǐng)按相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范來(lái)執(zhí)行和處理。